1）抗體濃度和質量問題以及抗體來源選擇錯誤。不是抗體濃度越高就越易出現陽性結果，抗原抗體反應有前帶和后帶效應，必須摸索最佳濃度。

2）抗原修復不全，對于甲醛固定的組織必須用充分抗原修復來打開抗原表位，以利于與抗體結合;建議微波修復用高火4次*6min試試。有人做過實驗，這是最佳的時間和次數。若不行，還可高壓修復。

3）組織切片本身這種抗原含量低；

4）血清封閉時間過長。

5）DAB孵育時間過短。

6）細胞通透不全，抗體未能充分進入胞內參與反應。

7）開始做免疫組化，一定要首先做個陽性對照片，排除抗體等外的方法問題。