固定是組織學制片的關鍵步驟，為的是使欲觀察的組織構造盡量接近它取材前的狀態，使組織離體或死亡后不發生變化，細胞內的蛋白質、脂肪、糖、酶等成分被轉變為不溶性物質，避免自溶與腐敗，并且令組織塊硬化便于制片，同時能使各組分產生不同的折光率及對不同染料的親和力，便于觀察鑒別。因此標本取材后需及時放入固定液中，10%福爾馬林溶液因其滲透力強、固定均勻、對組織收縮較少的特點，成為常規固定液。固定依標本大小決定浸泡時間，大標本可剖開固定。 因組織中含有較多水分，且水和石蠟不能互相溶解，因此不能直接進行石蠟包埋，還需經過某些溶劑逐步將組織塊中的水分置換出來。脫水劑中最常用的是酒精。從75%酒精開始，逐步升高酒精濃度，直至無水乙醇。脫水時間應根據組織塊的種類、大小及使用的固定液種類等因素而定。例如：45℃條件下，依次將標本浸泡于75%酒精、95% 酒精、無水乙醇I、無水乙醇II ,每道試劑浸泡30min。 大多數脫水劑不能與石蠟相溶，因此石蠟仍不能進入組織并包埋成供切片用的蠟塊。為此，還需要一種橋梁作用的溶劑，既能溶于脫水劑又能和包埋劑相溶，以便逐步將脫水劑置換成包埋劑。二甲苯是石蠟包埋中最常用的透明劑，不溶于水，易溶于無水乙醇，也是石蠟的溶劑。它的折光率為1.497，透明能力強但易使組織收縮變脆，因此不宜久留。例如：45℃條件下，二甲苯I中浸泡15min；二甲苯II中浸泡15min。為減少組織塊過度收縮，可在無水乙醇之后，設一道乙醇二甲苯混合液。 浸蠟是指透明過的組織塊在熔化的石蠟中浸漬的過程。目的是用石蠟代替二甲苯，在隨后的包埋中，由液態轉變成固態，使整個組織具有均勻一致的固態結構和足夠的硬度，以便切片機切片。浸蠟一般需要2-3h。 最常用的石蠟切片機是輪轉式切片機，切片厚度在3 μm-5 μm之間，依組織細胞密度、細胞大小調整切片厚度。 切片制成后，雖然能在光鏡下隱約分辨出一些組織輪廓，但要很好的辨別它的細微結構是很困難的。HE染色是組織學中常規制片最基本也是應用最廣泛的染色方法，用HE染色能顯示各種組織的正常結構特點和病理時病變的發生、發展及修復情況，而且染色的切片存放時間長，因此很適用于觀察、診斷或研究，在生物學和醫學領域的教學、 科研、病理診斷等工作中有著不可或缺的作用。常用方法：烘片后二甲苯I 5min,二甲苯II 5min,二甲苯III 5min, 無水乙醇1min, 95%酒精1min, 75%酒精1min,自來水沖洗數秒逐步脫蠟至水，然后蘇木素染3min,自來水沖洗數秒，分化液分化數秒后自來水沖洗返藍，伊紅染液染30s后逐步脫水，75%酒精30s, 95%酒精30s,無水乙醇 30s；然后用二甲苯透明1min。稍干后用中性樹膠封片，晾干。 |
